从1999年4月开始，我们就开展了体外消化率法在水产饲料配方上应用的研究。通过大量的试验，我们找出了体外消化率方法的合理酶用量和模拟鱼肠道缓冲消化体系的pH值环境、反应时间及反应温度，然后又通过大量的试验筛选出了标准鱼粉样，初步为鱼粉制定了体外消化率的质量指标，并从1999年7月起作为友谊饲料公司鱼粉采购质量控制必检指标之一。在体外消化率方法基本成熟的前提下，友谊饲料公司作为大型专业化水产饲料生产厂家之一，从我国渔业可持续发展与人民身体健康的角度出发，决定率先开发环保型优质鱼用水产饲料系列。我们认为环保型优质鱼用水产饲料应符合以下要求：①饲料中的各种营养能被鱼体充分吸收，且鱼体排泄到水中代谢物最少；②在鱼体摄食之前，饲料能保持相对的稳定性，不能有过多的营养素溶解于水体中；③饲料主要是由各种优质原料合理搭配而成，不额外添加大量的有可能影响到人身体健康的促生长物质；④对人体有害的物质不能在鱼体内蓄积；⑤用环保型饲料喂养的鱼类，其鱼肉营养价值及可食性不会比自然养殖的低；⑥在保证鱼肉品质的前提下，鱼类的各项生长指标处于较高的水平；⑦饲料营养物质能最大限度的被鱼体吸收，促进饲料向优质动物蛋白源的转化，提高人民的生活水平，
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体外消化率法之所以用于环保饲料的开发，是因为该方法能在较短时间内了解饲料原料的消化率数值，并能模拟每种鱼类的肠道环境，对单一饲料进行消化率数值的测定，因而能较准确的判断出鱼类对具体的某种饲料原料的消化吸收情况，从而很好的指导饲料配方，为优质环保饲料的开发提供最直接的参考数据。下面将体外消化率法的一些内容简单介绍如下，并附带介绍一下我们的实验结果：
1、体外消化率测定方法的原理
体外消化率测定方法的饲料样品在酶的作用下将不溶性的大分子物质（如不溶性蛋白质、淀粉等）降解为可溶性的小分子物质（如肽、氨基酸、糊精、葡萄糖等），在体内这些降解产物可被动物消化道吸收进入体内，在离体条件下，这些物质可溶解于水中，最后，以产生的可溶解物质量占饲料样品未消化前的百分比表示消化率的大小。
2、酶选择
在体外消化率的初期，为筛选消化率高的饲料原料。一般采用多酶片作为体外消化率的主要用酶；在体外消化率的中后期，主要是通过提取鱼类肠道（有胃鱼类可采用胃部粗酶液一肠道粗酶液两步酶解法，而对于无胃鱼类，则可用肠道粗酶液）消化酶来进行体外消化率的实验，以确定不同鱼类对原料消化吸收情况的差异，从而筛选出鱼类对不同原料的消化吸收数值，并依据动物性饲料与植物性饲料的分类体系（动物性饲料在我们进行的实验中其数值与植物性饲料相比明显偏低，然而在实际应用中我们往往认为动物性饲料比植物性饲料更易被动物消化吸收，即动物性饲料的氨基酸平衡要好于植物性饲料，故我们按照植物性与动物性饲料分类，把它们的消化率进行纵向比较，而不进行横向比较）对常用饲料原料进行体外消化率数值由低到高排列，从而为饲料配方时饲料原料的优先选择及饲料原料的用量比例提供参考。
3、实验方法
3.1肠道粗酶液法
3.1.1肠道粗酶液的提取
(1)解剖正常吃食的元胃活鱼，取鱼体全部肠道，将肠道内容物挤净、剪开，并用滤纸吸干肠道内外水分，称重并记录。
(2)将肠道剪碎，加入10倍（重量体积比）冷却的磷酸缓冲溶液，放人组织匀浆机（或玻璃匀浆器）中匀浆。
(3)将匀浆好的肠道液无损转移到离心机中，在3000r/m转速下，离心15分钟，取上清液，此为肠道粗酶液。
3.1.2样品消化
(1)样品的粉碎：欲消化的样品应通过40目金属筛。
(2)称样：称取需消化的饲料原料或成品0.5—1.0克（视样品蛋白含量的高低，高则少称，低则多称），无损失地转入15ml已知重量的离心管中。每个样品做2～3个平行。
(3)混合i准确吸取lOml肠道粗酶液，转入需加酶液的离心管中，盖上管塞，并充分混匀。
(4)消化：将上述已加好酶液的离心管，放到36℃的恒温振荡器中，振荡频率控制在125次／分左右。每隔30～40分钟将每个消化管拿出来手工振荡一次。消化时间在12～14小时（低蛋白样品需要时间短，高蛋白样品需要时间长）。
(5)洗涤：将消化好的样品离心(转速300JOr/m)15分钟，弃去上清液，在36℃的蒸馏水洗涤2～3次。
(6)烘干：将冲洗干净的消化好的样品，放入烘箱中烘干，烘箱温度控制在75～850C，直至烘至恒重。称重并记录。
3.1.3测定
(1)用凯氏定氮法测定消化前及消化后样品的粗蛋白含量，记录测定数值。
备注：空白消化率是指在样品中加入煮沸酶液进行体外消化的消化率数值，计算方法同上。
3.2多酶片法
多酶片法比较简单，将多酶片粉碎后直接加缓冲液并进行离心即可制得酶液，其它操作同肠道粗酶液法。
4、实验结果
我们目前已进行了常用原料的多酶片筛选实验与部分鱼类的体外消化率实验，下面仅介绍一下我们用多酶片法测定的部分实验结果。
5、讨论
多酶片筛选实验结果可用于对原料的筛选上，例如我们通过大量实验发现进口鱼粉的体外消化率在88%左右，而优质国产鱼粉的消化率在82%左右，于是我们可以制定出标准鱼粉样，然后拿其它的鱼粉样与之一起进行体外消化率数值的对比测定，这样就可以淘汰不合格原料。另外我们用提取的鱼肠道粗酶液对常用水产饲料原料鱼粉、棉粕、豆粕、菜粕等11种原料进行体外消化试验，发现这些原料的体外消化率值比用体内消化法测定结果低，这可能是因为体外与体内的消化环境有差异。体内消化时，未被消化的食物团到达肠道的某一部位，刺激该部位消化酶陆续释放，而体外消化无法满足这一条件。但从总体上看，体内消化法测定的值与体外消化法测定的值有一定的相关性。我们参照西南农大叶元土教授的试验的数据，将用三氧化二铬作为指示剂测定的上述饲料原料的表观消化率与我们体外消化率测定结果相比。
由此可见体外消化率方法可以有效地评价不同水产饲料原料的品质，且所需时间短，能够在实验室内完成，相对于体内消化率法能节省大量的物力与财力，故体外消化率测定方法在筛选水产饲料原料上有广泛的应用前景。
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